Know Your Testing Options. If you have insurance, start by contacting your doctor or visiting your local pharmacy. If your employer or school requires a test, go through your job or educational facility. Book a Test at a County or Partner Site. Additional Resources. El intervalo de concentraciones elegidos para cada antimicrobiano debe incluir los puntos crticos, o sea aquellos que definen si una cepa es sensible o resistente. Basados en estudios previos, se recomiendan las concentraciones de antifngicos que estn recogidas en la siguiente tabla.
Se dispensan l de los antifngicos a una concentracin 2x en las columnas de la 1 a la 10 con una pipeta multicanal. Cada pocillo de la placa se inocula con l de la suspensin del inculo. El pocillo 11 control de crecimiento, que solo contiene l de RPMI , se aaden l del inculo. El pocillo 12 es control de esterilidad de la tcnica y por tanto debe contener solo RPMI.
Incubacin Candida spp. Tras este periodo de incubacin se procede a leer los resultados. Lectura de los resultados La CIM es la concentracin ms baja de antifngico que inhibe sustancialmente el crecimiento del microorganismo detectado visualmente.
Para la 5-fluorocitosina, los azoles y las equinocandinas es la concentracin ms baja que tiene una puntuacin de 2 disminucin prominente de la turbidez. Para aquellos aislamientos que producen grumos en el fondo, la dispersin de los mismos pipeteando o agitando puede ayudar a la interpretacin de los resultados.
Estos objetivos se alcanzan si se utilizan cepas de control seleccionadas por su estabilidad gentica y por su utilidad para controlar el mtodo que se est ensayando. Las cepas de control de calidad son evaluadas de la misma forma y se incluyen siempre que se ensaye un aislado, se utilizan C. Las pruebas en medio slido y en especial las de difusin son simples de realizar y los resultados se obtienen de forma rpida, siendo, en teora, muy fciles de interpretar.
Sin embargo, en este punto hay que ser muy estrictos, pues si las tcnicas no se realizan siguiendo rigurosamente las instrucciones sugeridas por los fabricantes, es posible que se obtengan resultados errneos.
Medio de cultivo Es muy importante la eleccin del medio de cultivo ya que su composicin influye en el tamao de la zona de inhibicin, en la actividad del antimicrobiano, en la velocidad de difusin del antimicrobiano y en la velocidad de crecimiento del microorganismo. Debido a esto, se acord que el medio de cultivo debe reunir las siguientes caractersticas: 1. La receta del medio debe especificar la composicin de productos 2. El medio debe permitir el crecimiento de la mayora de los patgenos.
El medio debe estar tamponado de forma que no se produzca un cambio significativo en su pH cuando los microorganismos crezcan. El medio no debe ser antagonista de ninguno de los antimicrobianos ensayados.
El medio debe ser isotnico con la sangre, de forma que se pueda aadir sangre completa para permitir el crecimiento de microorganismos fastidiosos. El medio debe producir resultados satisfactorios en los ensayos de sensibilidad con las cepas de control de calidad. El medio debe ser reproducible, es decir el uso de diferentes lotes debe producir resultados similares. Las placas de Petri deben de tener una profundidad de 4 mm 1.
Para lograr esa profundidad, si la placa es de 9 cm de dimetro se necesitan 25 ml de medio y si es de 15 cm, 60 ml. Es necesario secar la superficie antes de utilizarlas, colocando las placas durante media hora, en la estufa de 37C boca abajo y con las tapas ligeramente abiertas para permitir que la humedad se evapore. Preparacin del inculo Para la preparacin del inculo se parte de un cultivo de 24 h, en Agar Sabouraud dextrosa a 35 2 C.
De este cultivo, se tocan cinco colonias y se suspenden en 5 ml de solucin salina estril 8. El resultado de la suspensin se homogeneiza durante 15 segundos, y su turbidez se ajusta a 0,5 de la escala McFarland equivalente a 1 x 10 6 a 5 x 10 6 UFC. Inoculacin de las placas Las placas se deben de inocular de forma que se produzca un crecimiento confluente o semiconfluente.
La utilizacin de inculos grandes que producen una zona limtrofe engrosada o inculos pequeos que producen colonias separadas no es adecuada ya que la zona de inhibicin resultante no refleja la sensibilidad o resistencia real del aislado. La siembra de las placas puede realizarse de dos formas: Siembra por dispersin con hisopo Se debe aplicar el siguiente procedimiento: se sumerge un hisopo de algodn estril en el inculo.
El exceso de lquido es eliminado girando el hisopo varias veces contra las paredes interiores del tubo. El inculo se extiende por toda la superficie de la placa 3 veces seguidas. En cada repeticin, se gira la placa 60, de forma que se asegure la distribucin uniforme del inculo. Se distribuyen homogneamente por la superficie. El exceso de lquido se retira con una pipeta Pasteur estril.
Se deja secar la superficie durante 15 minutos a temperatura ambiente. Antifngicos Los antifngicos pueden colocarse en distintos reservorios: pocillos en el agar, cilindros que contienen el antimicrobiano, tabletas o discos.
La aparicin del disco de papel de filtro impregnado de antimicrobiano revolucion esta tcnica y en la actualidad es el reservorio de eleccin para las pruebas de susceptibilidad. Las tabletas son tambin un mtodo muy utilizado que se encuentra disponible comercialmente. Los discos deben tener un dimetro de 6,35 mm. Para prepararlos se puede utilizar un sacabocados cuyo dimetro interno sea de 6,35 mm. Lo ms prctico es adquirirlos en el comercio.
Colocacin de los discos de antimicrobiano Los discos de antimicrobianos se deben colocar no ms de 15 minutos tras la inoculacin de las placas, de esa forma la difusin y el crecimiento ocurren en simultneo. Se pueden aplicar con la ayuda de un dispensador o con pinza estril.
Para asegurar un completo contacto se aconseja presionar el disco contra la superficie del agar. Barrio JL. Medicine ; Antibiotics and infections. Nueva York: Churchill Livingstone, Biochemistry of antimicrobial action. Medicamentos antimicrobianos.
Meyers BR. Antimicrobial prescribing. Princeton: Antimicrobial Prescribing, Peterson PK, Verhoef J. The Antimicrobial Agents, Annual 1. Amsterdam: Elsevier, ISSN: X. Descargar PDF. Tabla 1.
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